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產(chǎn)品資料

影響凝膠聚合的因素有哪些

上傳時(shí)間:2023/11/12 來(lái)源:易買(mǎi)儀器網(wǎng) 點(diǎn)擊:

1) Acr及Bis的純度:應選用分析純的Acr及Bis,如試劑不純,含有雜質(zhì)或丙烯酸時(shí),則凝膠聚合不均一,或聚合時(shí)間延長(cháng)甚至不聚合, 因而需進(jìn)一步純化。 Acr和Bis貯液的pH值為4.9-5.2,當pH值的改變大于0.4pH單位則不能使用,因在偏酸或偏堿的環(huán)境中,它們可不斷水解放出丙烯酸和NH4+ 而引起pH值改變,從而影響凝膠聚合。 因此,配制的Acr和Bis貯液應置棕色瓶中,4℃貯存 ,存放期一般不超過(guò)1-2個(gè)月為宜。

2)AP、核黃素、TEMED:增加AP和TEMED可加快聚合速率,但過(guò)量的AP和TEMED會(huì )引起電泳時(shí)燒膠和譜帶變形。應選擇合適的配方使聚合在40-60min內完成。

3)pH:堿性條件下聚合快,但堿性過(guò)強時(shí)膠硬而脆,需高pH時(shí)應減少AP和TEMED用量,制酸性膠可加AgNO3等促進(jìn)聚合。

4)溫度:溫度高聚合快,但高濃度凝膠聚合時(shí)易產(chǎn)生小氣泡,低溫(5℃)聚合凝膠會(huì )變得脆而混濁,一般25-35℃聚合較好。

5)氧分子:氧分子阻礙凝膠聚合,故不含SDS的凝膠先抽真空脫氣,再加引發(fā)劑。

聚丙烯酰胺凝膠電泳

PAGE應用范圍廣,可用于蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物分子的分離、定性、定量及少量的制備,還可測定相對分子質(zhì)量、等電點(diǎn)等。 聚丙烯酰胺凝膠電泳又有以下幾種:

非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳

變性聚丙烯酰胺凝膠電泳

連續密度梯度電泳

聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳

聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳

聚丙烯酰胺凝膠電泳 (DNA序列分析)

1 儀器: PCR擴增儀(96孔)、序列分析電泳槽:DYCZ-20C\DYCZ-20G、高壓電源:DYY-10C或DYY-12型 水平搖床(WD-9405D)、電子天平 (精確1毫克) 、移液槍?zhuān)篧D-2108 、雙顯磁力攪拌器、高壓蒸汽滅菌鍋、pH計、水浴鍋、高速臺式冷凍離心機、微型離心機:WD-2105A/B等

2 實(shí)驗試劑: 乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)、Tris堿、10×Buffer、 dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、去離子甲酰胺、溴酚藍 、 二甲苯青FF、甲叉雙丙烯酰胺、丙烯酰胺、硼酸、尿素、 親和硅烷、剝離硅烷、四甲基乙二胺、過(guò)硫酸銨、硝酸銀 、DNA Marker(根據PCR片段大小選擇合適的Marker范圍, 如SSR實(shí)驗的范圍在100bp—400bp之間)

聚丙烯酰胺凝膠分為非變性凝膠和變性凝膠 所謂非變性凝膠,即在凝膠中不加SDS和巰基乙醇等變性劑,這種凝膠中,蛋白質(zhì)仍保持活性,其遷移率受它的靜電荷與分子大小兩個(gè)因素的影響。因此在非變性凝膠中進(jìn)行電泳是不能測得分子量的,常用于酶的鑒定、同工酶分析和提純。 所謂變性凝膠,即在凝膠中加入變性劑,如尿素、SDS(十二烷基磺酸鈉)、巰基乙醇、DTT等。這些變性劑可以破壞或改變蛋白質(zhì)的結構,把絕大部分蛋白質(zhì)分離成組成它們的亞基。同時(shí)在蛋白質(zhì)分子周?chē)鼑舜罅控撾姾?。這種電荷基本上掩蓋了無(wú)變性劑存在時(shí)正常就有的任何電荷。蛋白質(zhì)在這種變性凝膠中的遷移率與它們分子量的對數成直線(xiàn)關(guān)系。因此利用變性凝膠進(jìn)行電泳可以測得蛋白質(zhì)的分子量。目前應用較多的變性劑為SDS。


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